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Nº
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Reagentes e Padrões
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Pureza
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1
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Acetonitrila
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Grau HPLC
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2
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Ácido trifluoroacético
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AR
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3
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Lauril sulfato de sódio
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AR
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4
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N-Nitroso-Desloratadina
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98.9%
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1.3 Materiais de Experimento e Equipamentos Auxiliares
Limpeza ultrassônica
Misturador vortex
2. Método de Experimento
2.1 Preparação da Solução
2.1.1 Solução Aquosa de Lauril Sulfato de Sódio (SDS): Pesar 0,865g de lauril sulfato de sódio e adicionar 0,5mL de ácido trifluoroacético. Diluir para 1000mL com água e misturar bem até completa dissolução.
2.1.2 Solvente: Mesmo que a fase móvel (Medir com precisão 570mL de solução aquosa de lauril sulfato de sódio e 430mL de acetonitrila, misturar bem e pronto para uso).
2.1.3 Solução Linear: Pesar com precisão uma quantidade apropriada do padrão de referência N-Nitroso-Desloratadina e dissolver e diluir com a fase móvel para obter uma solução contendo aproximadamente 0,8μg/mL como solução estoque padrão. Em seguida, pipetar com precisão 1,0mL, 1,5mL, 2,0mL, 4,0mL e 10,0mL da solução estoque padrão em cinco balões volumétricos separados de 100mL. Diluir para o volume com a fase móvel e misturar bem para preparar curvas de trabalho da série padrão com concentrações de 8ng/mL, 12ng/mL, 16ng/mL, 32ng/mL e 80ng/mL.
2.1.4 Solução Padrão de Referência: Pesar com precisão uma quantidade apropriada do padrão de referência N-Nitroso-Desloratadina, dissolver e diluir com a fase móvel para preparar uma solução contendo aproximadamente 16ng/mL de N-Nitroso-Desloratadina, como solução padrão de referência.
2.2 Preparação da Amostra
2.2.1 Solução da Amostra
Pipetar com precisão uma quantidade apropriada de API de desloratadina, dissolver e diluir com a fase móvel para preparar uma solução contendo aproximadamente 0,2mg/mL de desloratadina, como solução da amostra.
2.2.2 Solução de Precisão
Pesar aproximadamente 20mg de API de desloratadina em um balão volumétrico de 100mL. Adicionar um volume apropriado de solução padrão de referência N-Nitroso-Desloratadina, dissolver e diluir para o volume com a fase móvel para preparar uma amostra com pico de 100%. Misturar bem para obter a solução de precisão.
3. Resultado do Experimento
3.1 Especificidade
Fig. 2 Cromatograma do Teste de Especificidade
Nota: O solvente não interfere na detecção de N-Nitroso-Desloratadina, e outros picos de impurezas na solução de teste também não interferem na determinação da impureza N-Nitroso-Desloratadina.
3.2 Teste Linear
Fig. 3 Cromatograma de Sobreposição para o Teste de Impureza N-Nitroso-Desloratadina
Fig. 4 Curva Padrão para Impurezas de N-Nitroso-Desloratadina
Nota: Os resultados experimentais demonstram que o coeficiente de correlação linear (R) para o teste de impureza N-Nitroso-Desloratadina excede 0,999, atendendo aos requisitos do teste.
3.3 Teste de Repetibilidade
Fig. 5 Cromatogramas de Repetibilidade de 16 ng/mL Padrão (6 Injeções)
Tabela 3 Dados do Teste de Repetibilidade para 16 ng/mL Padrão (6 Injeções)
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Composto
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Tempo de Retenção (min)
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|
N-Nitroso-Desloratadina
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15.426
|
|
15.432
|
|
15.414
|
|
15.416
|
|
15.432
|
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15.417
|
|
Média
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15.421
|
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RSD (%)
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0.045
|
Nota: Com base nos dados da tabela acima, a repetibilidade do tempo de retenção para N-Nitroso-Desloratadina é de 0,045%, e a repetibilidade da área do pico é de 2,043%, indicando boa repetibilidade.
3.4 Teste de Precisão
Fig. 6 Cromatograma de Sobreposição de Precisão para API de Desloratadina
Tabela 4 Precisão do API de Desloratadina (N-Nitroso-Desloratadina)
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Nível
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Valor conhecido (ng)
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Com pico (ng)
|
Valor medido (ng)
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Recuperação (%)
|
Média (%)
|
|
100%
|
0.00
|
1611.52
|
1656.365
|
99.690
|
100.11
|
|
100%
|
0.00
|
1610.546
|
96.932
|
|
100%
|
0.00
|
1686.721
|
101.517
|
|
100%
|
0.00
|
1704.476
|
102.585
|
|
100%
|
0.00
|
1615.701
|
97.242
|
|
100%
|
0.00
|
1706.194
|
102.689
|
Nota: A taxa de recuperação de N-nitroso-desloratadina em seis amostras variou de 97,24% a 102,69%, com um RSD de 2,58%. Esses resultados demonstram que o método atinge excelente precisão e repetibilidade para a detecção dessa impureza.
3.5 Teste de Limite de Detecção (LOD)
Fig. 7 Cromatograma do Padrão de Referência N-Nitroso-Desloratadina a 8ng/mL
Tabela 5 Dados do Teste para o Padrão de Referência N-Nitroso-Desloratadina a 8ng/mL
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Composto
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Tempo de Retenção (min)
|
Área do Pico (mAU*s)
|
SNR
|
|
N-Nitroso-Desloratadina
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15.434
|
1.213
|
30.042
|
Nota: Com base nos dados do teste para o padrão de referência N-Nitroso-Desloratadina a 8ng/mL na tabela acima, o limite de detecção teórico (LOD) calculado usando a razão sinal-ruído de 3 vezes é de 0,7989ng/mL.
3.6 Teste de Matéria-Prima para um Fabricante Específico
Fig. 8 Cromatograma do Teste de API para um Fabricante Específico
Nota: Nenhuma N-Nitroso-Desloratadina Detectada em API.
4. Conclusão
Um estudo sobre a impureza nitrosamina N-Nitroso-Desloratadina no Ingrediente Farmacêutico Ativo (API) de Desloratadina foi conduzido com base no documento de orientação da FDA recentemente emitido em relação ao estabelecimento de limites de ingestão aceitáveis para Impurezas Relacionadas a Substâncias de Medicamentos Nitrosaminas (NDSRIs). De acordo com o documento, o valor de Ingestão Aceitável (IA) é definido em 400ng/dia. Combinado com a dose diária máxima do produto (5mg), o limite de controle no API não deve exceder 80ppm. A validação metodológica foi conduzida usando o sistema de Cromatografia Líquida de Alta Performance (HPLC) da Wayeal, série LC3400, equipado com um detector ultravioleta (UV). O método analítico validado foi aplicado para testar as amostras do ingrediente farmacêutico ativo, e nenhuma impureza nitrosamina (N-nitroso-desloratadina) foi detectada. Todos os dados acima atendem aos requisitos do método da farmacopeia para instrumentos.
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