Determinação de Resíduos de β-Agonistas em Carne Suína por Meio do Sistema de Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massas em Tandem LCMS-TQ9200 Wayeal

Esta experiência refere-se ao "GB 31658.22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkOs resultados experimentais indicam que o ensaio de adequação do sistema demonstrou picos de boa forma e boa linearidade, satisfazendo os requisitos experimentais.A repetibilidade do tempo de retenção para a solução de trabalho padrão do β- agonista foi inferior a 1%Para a solução de ensaio de sensibilidade dos β-agonistas, as relações sinal/ ruído dos picos principais em concentrações de 0.2 ng/ ml e 0,5 ng/ ml foram significativamente superiores a 3 e 10, respectivamente, satisfazendo os requisitos experimentais.

Não foram detectados β-agonistas no ensaio de amostra de carne de porco..

Palavras chave:Cromatografia líquida - Espectrometria de massa em tándem; β-agonistas; Clenbuterol; Segurança alimentar.

1Instrumentos e reagentes

1.1 Lista de configurações do LCMS

Quadro 1 Lista de configurações dos instrumentos

1.2 Reagentes e normas

Quadro 2 Lista de reagentes e normas

1.3 Material experimental e equipamento auxiliar

Limpeza ultra-sônica

Misturador de vórtice

Banho de água de temperatura constante Shaker

Centrífuga de alta velocidade

2Método experimental

2.1 Pré-tratamento da amostra

2.1.1 Hidrólise e extracção enzimáticas

Pesar 2 g da amostra (com precisão ± 0,05 g) num tubo de centrífuga de 50 ml. Adicionar 6 ml de solução tampão de acetato de amónio de 0,2 mol/l e 40 μl de β-glucuronidase/arilsulfatase.e incubar a 37 °C no escuro, agitando num banho de água durante 16 horasDeixar arrefecer até à temperatura ambiente para utilização posterior.

2.1.2 Extração, purificação e concentração

Tomar a solução preparada, adicionar 100μL da solução de trabalho padrão interna de 100ng/mL, o vórtice para misturar completamente e centrifugar a 8000r/min durante 8 minutos.1 mol/l de solução de ácido perclóricoApós centrifugamento a 8000 r/min durante 8 minutos, ajustar o pH do supernatante para 10 ± 0.5 utilizando uma solução de hidróxido de sódio de 10 mol/lAdicionar 15 ml de acetato de etilo, agitar a velocidade média durante 5 minutos e centrifugar a 5000 r/min durante 5 minutos.Adicionar 10 ml de éter metílico de tert-butilo, agitar a velocidade média durante 5 minutos, centrifugar a 5000 r/min durante 5 minutos, recolher a camada orgânica superior, combinar todas as camadas orgânicas e evaporar até secar sob um fluxo de nitrogénio a 50°C.Dissolver o resíduo em 5 ml de solução de ácido fórmico a 2% e colocar de ladoPreparar uma coluna de extracção de fase sólida de troca de catiões de modo misto, ativando-a sequencialmente com 3 ml de metanol e 3 ml de ácido formico a 2%.enxaguar sequencialmente com 3 ml de ácido fórmico a 2% e 3 ml de metanol, e secar sob vácuo. Eluir a coluna com 3 ml de 5% de solução de metanol amoniado. Evaporar o eluado até secar sob um fluxo de nitrogénio a 50 °C.Solução de ácido fórmico a 1% (10:90, v/v), misturar cuidadosamente e filtrar através de uma membrana microporosa de 0,22 μm para análise por cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem.

2.2 Condições de experimentação

2.2.1 Condições cromatográficas líquidas

Coluna de cromatografia C18, 1,8 μm 2,1*100 mm

Fase móvel: A: 0,1% de ácido fórmico na água; B: metanol

Taxa de fluxo: 0,3 mL/min

Temperatura da coluna: 40°C

Volume de injecção: 3μL

3.Teste de adequação do sistema

O ensaio de adequação do sistema mostra que os picos-alvo têm uma boa forma sem interferência de outros picos de impurezas, cumprindo os requisitos experimentais.

Fig. 1 Cromatograma de sete testes de β-agonistas (1ng/mL)

3.2 Alcance linear

Com soluções-padrão de β-agonistas e soluções de trabalho de concentração intermédia, foi preparada uma curva-padrão por etapas.com R2 > 0.99, indicando uma boa relação linear.

Quadro 3 Quadro de intervalos lineares para β-agonistas

Fig. 2 Cromatograma de curva padrão de sete β-agonistas

3.3 Limite de detecção (LOD) e limite de quantificação (LOQ)

Neste método, o limite de detecção (LOD) e o limite de quantificação (LOQ) dos β-agonistas são fixados em 0,2 ng/mL e 0,5 ng/mL, respectivamente.a relação sinal/ruído nas concentrações especificadas para LOD e LOQ é superior a 3 e 10 respectivamente;, respectivamente, cumprindo os requisitos de sensibilidade experimental.

Tabela 4 Relações sinal/ruído correspondentes para LOD e LOQ de cada composto

Fig. 3 Cromatogramas iónicos de sete β-agonistas em concentrações LOD e LOQ

3.4 Ensaio de precisão

Uma solução mista de substâncias- padrão β- agonistas em concentrações baixas, médias e elevadas foi tomada e injetada seis vezes consecutivas para comparar o tempo de retenção e os desvios da área de pico.Os resultados são apresentados no quadro seguinteTodos os β-agonistas apresentaram desvios de tempo de retenção inferiores a 1% e desvios de área de pico inferiores a 3%, cumprindo os requisitos experimentais.

Quadro 5 Ensaio de precisão para cada composto

Fig. 4Cromatogramas de ensaio de precisão de sete β-agonistas (6 injecções)

3.5 Teste de amostragem

As amostras de carne de porco adquiridas no mercado foram testadas de acordo com o método de pré-tratamento mencionado e não foram detectados β-agonistas.Não foram observados picos cromatográficos nos tempos de retenção correspondentes aos sete β-agonistas., enquanto os outros picos representam os sinais da matriz após a hidrólise enzimática.

Fig. 5 Cromatograma de ensaio de amostras de carne de porco

4Conclusão

Este método utiliza o sistema Wayeal LCMS-TQ9200 de cromatografia líquida-tandem de espectrometria de massa para a determinação de β-agonistas na carne suína.Os dados demonstram que todos os picos cromatográficos apresentam uma boa forma sem cauda, a sensibilidade atende aos requisitos experimentais, os coeficientes de correlação lineares excedem 0.99, e a precisão é satisfatória com desvios do tempo de retenção inferiores a 1% e desvios da área de pico dentro de 3% para seis injecções consecutivas de cada composto.Não foram detectados β-agonistas nos testes de amostras de carne de porco.Estes resultados indicam que o método, equipado com o sistema Wayeal LC-MS/MS, satisfaz os requisitos de detecção qualitativa e quantitativa de rotina para os analisados-alvo.