Determinação do Análogo Hidroxi da Metionina em Ração por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência da Wayeal

A metionina hidroxi-análogo (MHA) é um aditivo de ácido orgânico amplamente utilizado na indústria dos alimentos para animais como substituto da metionina.suínos (porquinhos e suínos de acabamento)Como substituto da metionina, demonstra efeitos significativos na redução dos custos dos alimentos para animais.Melhorar o ambiente intestinal dos animais, e reforçando a imunidade animal.

A cromatografia líquida de alto desempenho combinada com a detecção UV é adequada para a análise de várias amostras complexas de alimentos para animais, devido à sua excelente eficiência de separação,resistência à interferência da matriz, alta sensibilidade de detecção e resultados quantitativos estáveis e fiáveis.Esta experiência foi realizada em conformidade com a norma "Determinação do análogo hidroxi metionina na alimentação animal por cromatografia líquida de alto desempenho" (GB/T 19371-2025).. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, permitindo tanto a detecção qualitativa como a análise quantitativa precisa do análogo hidroxi metionina em vários tipos de amostras de alimentos para animais.

Palavras-chave: alimentos para animais; análogo hidroxi metionina; cromatografia líquida de alto desempenho.

1Instrumentos e reagentes

1.1 Lista de configurações HPLC

Quadro 1 Lista de configurações do sistema de cromatografia líquida de alto desempenho

1.2 Lista de reagentes e normas de referência

Quadro 2 Lista de reagentes e normas de referência

1.3 Condições de cromatografia líquida

Quadro 3 Condições de cromatografia líquida de alto desempenho

1.4 Materiais experimentais e equipamento auxiliar

Limpeza ultra-sônica;

Misturador de vórtice;

Centrífugas de alta velocidade;

Balança analítica;

Shaker.

2Método experimental

2.1 Preparação da solução

2.1.1 Soluções de curva padrão:

Pesar com precisão uma quantidade adequada de metionina hidroxi-análogo padrão de referência e dissolvê-lo em 10% de acetonitril para preparar uma série de soluções padrão em concentrações de massa de 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0- 20 anos.0- Quarenta.0, e 80.0μTransferir com precisão 5 ml de cada solução padrão para tubos de ensaio tampados de 15 ml separadamente, adicionar com precisão 0,1 ml de solução de hidróxido de potássio a 50% e fazer o vórtice durante 15 segundos.Então adicione com precisão 0.2 ml de solução de ácido fosfórico a 50% e vórtice durante mais 15 segundos. Centrifugar a 8000 r/min durante 5 minutos. Passar o supernatante através de um filtro de membrana microporosa antes da análise.

2.1.2 Soluções de amostras de ensaio:

Pesar 5 g de amostra de ração num recipiente, adicionar 50 ml de 10% de solução de acetonitrilo e misturar durante 30 minutos. Colocar num agitado e agitar durante 30 minutos. Centrifugar a 8000 r/min durante 5 minutos,e reter o supernatante para utilização posteriorTransferir com precisão 5 ml do supernatante acima para um tubo de ensaio de 15 ml. Adicionar com precisão 0,1 ml de solução de hidróxido de potássio 50% e vórtice por 15 s. Em seguida, adicionar com precisão 0.2 ml de solução de ácido fosfórico a 50% e vórtice durante mais 15 s. Centrifugar a 8000 r/min durante 5 minutos. Passar o supernatante através de um filtro de membrana microporosa antes da análise. Preparar duas soluções paralelas de amostras de ensaio.

2.1.3 Soluções de ensaio de recuperação:

Transferir com precisão 2,5 ml do supernatante da amostra e 2,5 ml de cada solução da série padrão para um tubo de ensaio com tampão de 15 ml. Adicionar com precisão 0.1 ml de solução de hidróxido de potássio a 50% e vórtice durante 15 s. Em seguida, adicionar com precisão 0,2 ml de solução de ácido fosfórico a 50% e o vórtice por mais 15 s. Centrifugar a 8000 r/min durante 5 minutos.Passar o supernatante através de um filtro de membrana microporosa antes da análise.

3Resultado do experimento.

3.1 Linearidade e alcance

Tabela 4 Tabela de concentração da curva padrão

Fig. 1 Curva padrão do análogo hidroxi-metionina

Nota: Foram tomadas quantidades adequadas da solução-padrão de referência do análogo hidroxi-metionina e diluídas em série até uma série de concentrações para a preparação da curva-padrão.O intervalo linear foi 0.5- Não.80.0μg/ ml e o coeficiente de correlação (R) foi de 0.99983, indicando uma excelente linearidade para o analito.

3.2 Precisão

Fig. 2 Cromatogramas sobrepostos de ensaio de precisão para a norma de referência (20,0 μg/mL)

Quadro 5 Dados de ensaio de precisão para a norma de referência (20,0 μg/mL)

Nota: O padrão de referência do análogo hidroxi-metionina (a uma concentração de 20.0μA repetibilidade (RSD) do tempo de retenção foi de 0,084%, e a da área de pico foi de 0,391%, indicando uma boa precisão do instrumento.

3.3 Recuperação

Fig. 3 Cromatogramas sobrepostos do ensaio de recuperação do análogo hidroxi-metionina nos alimentos para animais

Quadro 6 Dados dos ensaios de recuperação do análogo hidroxi-metionina nos alimentos para animais

Nota: A amostra foi misturada com o padrão de referência a uma concentração de 40.0μA recuperação obtida foi de 88,56%, indicando uma boa precisão do método.

3.4 Limite de detecção (LOD)

Fig. 4 Cromatograma do Análogo Padrão de Metionina Hidroxi (2.5μg/mL)

Quadro 7 Dados de ensaio para o padrão de referência de análogos de metionina hidroxi (2.5μg/mL)

Nota: Com base nos dados dos ensaios do padrão de referência de análogos de metionina hidroxi a 2,5 μg/mL, conforme indicado no quadro acima, o limite teórico de detecção (LOD) foi calculado como 0.033μg/mL a uma relação sinal/ruído de 3 (S/N = 3).

3.5 Ensaio de uma amostra de ração

Fig. 5 Cromatograma de uma amostra de ração

Observação: O análogo hidroxi metionina foi detectado numa amostra de ração com uma concentração de 0.402μg/mL.

4Conclusão

Este experimento foi realizado em conformidade com a norma "Determinação do análogo hidroxi-metionina na alimentação animal por cromatografia líquida de alto desempenho" (GB/T 19371-2025),utilizando o cromatógrafo líquido Wayeal da série LC3400 de alto desempenho equipado com um detector UVOs resultados experimentais mostraram que o pico alvo exibia boa simetria e um elevado número de placas teóricas.5- Não.80.0μg/ ml, o coeficiente de correlação (R) foi superior a 0.9998Os valores RSD para o tempo de retenção e a área de pico da norma de referência MHA (20.0μA recuperação de MHA nas amostras de ração aumentou para 40.0μO limite teórico de detecção (LOD) para MHA foi determinado como sendo 0.033μO MHA foi detectado com êxito numa amostra de alimentos para animais numa concentração de 0.402μTodos os dados acima referidos satisfazem os requisitos do método da farmacopéia para o desempenho do instrumento.