Determinação de Impurezas de Nitrosaminas em Comprimidos de Cloridrato de Propranolol por Cromatografia Líquida

Palavras-chave: propranolol, cromatografia líquida de alto desempenho, impurezas de nitrosaminas

1Instrumentos e reagentes

1.1 Lista de configurações do sistema HPLC

1.2 Reagentes e soluções-padrão

Quadro 2 Reagentes e soluções-padrão

1.3 Materiais de experimentação e equipamento auxiliar

Limpeza ultra-sônica

Misturador de vórtice

2Método experimental

2.1 Preparação da solução

2.1Solução de hidróxido de sódio: tomar 4 g de hidróxido de sódio, dissolver em 50 ml de água e misturar bem.

2.1.2 Ácido acetonitrilo-água-sulfúrico (55:45:0.1) Mistura: tomar 1,6 g de sulfato de sódio dodecil e 0,31 g de fosfato de diidrogénio de tetrabutilamónio, adicionar 1 ml de ácido sulfúrico, 450 ml de água e 550 ml de acetonitrilo, ajustando o pH para 3.3 com solução de hidróxido de sódio de 2 mol/l, e misture bem.

2.1.3 Solvente: igual à fase móvel.

2.1.4 Solução linear: pesar com precisão uma quantidade adequada de N-nitroso-propranolol padrão de referência,dissolver e diluir com fase móvel para obter uma solução contendo aproximadamente 200 ng por 1 ml como solução de base padrão. Em seguida, transferir com precisão volumes adequados da solução de base para seis frascos volumétricos de 100 ml, diluídos até à marca com fase móvel,e misturar bem para preparar uma série padrão de curvas de trabalho com concentrações de0,8ng/mL, 1ng/mL, 2ng/mL, 3ng/mL, 4ng/mL e 6ng/mL.

2.1.5 Solução-padrão de referência: pesar com precisão uma quantidade adequada de N-nitroso-propranolol padrão de referência,dissolver e diluir com fase móvel para preparar uma solução contendo aproximadamente 2 ng de N-Nitroso-propranolol por 1 ml como solução-padrão de referência.

2.2 Preparação da amostra

2.2.1 Amostra Solução: pesar com precisão uma quantidade adequada de comprimidos de cloridrato de propranolol em pó fino, dissolver e diluir com fase móvel para preparar uma solução contendo aproximadamente 0.27 mg de propranolol por 1 ml como solução de amostra.

2.2.2 Precisão Solução: pesar com precisão aproximadamente 297 mg de comprimidos de cloridrato de propranolol em pó fino num frasco volumétrico de 100 ml.Adicionar uma quantidade adequada de solução-padrão de referência de N-Nitroso-propranolol, dissolver e diluir até à marca com a fase móvel para preparar uma amostra 100% picada.

3Resultado do experimento.

3.1 Especificidade

Fig. 2 Cromatograma de Especificidade

Nota: O solvente não interfere na detecção de N-Nitroso-propranolol,e os picos cromatográficos de outras impurezas na solução de ensaio também não interferem na determinação da impureza N-Nitroso-propranolol.

3.2 Ensaio linear

Fig. 3 Curva padrão de impureza de N-nitroso-propranolol

Nota: Os resultados experimentais mostram que o coeficiente de correlação (R) da curva de ensaio de impurezas de N-Nitroso-propranolol excede 0.999, satisfazendo os requisitos do ensaio.

3.3 Ensaio de repetibilidade

Fig. 4 Cromatogramas de seis injecções replicadas para 2ng/mL padrão

Quadro 3 Dados de seis injecções repetidas para o padrão de 2 ng/mL

Nota: Tal como mostrado na tabela acima, a repetibilidade do tempo de retenção do N- nitroso- propranolol é de 0,043%, e a repetibilidade da área de pico é de 0, 464%, indicando uma boa repetibilidade.

3.4 Ensaio de precisão

Fig. 5 Cromatogramas de precisão sobrepostos de N-Nitroso-propranolol em comprimidos

Tabela 4 Precisão dos comprimidos de cloridrato de propranolol (N- nitroso- propranolol)

Nota: A recuperação de N-nitroso-propranolol em seis amostras variou de 96,98% a 104,71%, com uma recuperação média de 101,38%.

3.5 Ensaio LOD

Fig. 6 Cromatograma de ensaio de N-Nitroso-propranolol a uma concentração padrão de 2 ng/ml

Quadro 5 Dados de ensaio de referência de N-nitroso-propranolol a uma concentração padrão de 2 ng/ml

Nota: Com base nos dados dos ensaios para o padrão de referência de N-nitroso-propranolol a uma concentração de 2 ng/mL no quadro acima,O limite teórico de detecção para o N-nitroso-propranolol é calculado como 0.151ng/mL, utilizando como critério limite de detecção uma relação sinal/ruído de 3:1

3.6 Ensaios com comprimidos de marca

Fig. 7 Cromatograma de ensaio de comprimidos de marca

Nota: N- nitroso- propranolol não foi detectado nos comprimidos da marca.

4Conclusão

A study on the nitrosamine impurity N-nitroso-propranolol in propranolol hydrochloride tablets was conducted in accordance with the FDA's recently published guidance document on establishing acceptable intake levels for Nitrosamine Drug Substance-Related Impurities (NDSRI)De acordo com este documento, o valor de IA (Administração Aceitável) é calculado em 1500 ng/ dia..A validação do método foi efectuada utilizando a série de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC) da Wayeal® equipada com um detector UV.As amostras de comprimidos foram analisadas utilizando o método de detecção validado, e não foram detectadas impurezas de nitrosamina N-nitroso-propranolol.