Determinação de Resíduos de Antibióticos Quinolonas em Carne de Frango pelo Sistema de Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massas (LC-MS/MS) Wayeal LCMS-TQ9200
O Padrão Nacional de Segurança Alimentar da China "GB 31650-2019 Limites Máximos de Resíduos para Medicamentos Veterinários em Alimentos" especifica os limites máximos de resíduos (LMRs) de certos antibióticos quinolonas em produtos alimentícios de origem animal. Além disso, "GB 31658.17-2021 Padrão Nacional de Segurança Alimentar - Determinação de Resíduos de Tetraciclinas, Sulfonamidas e Quinolonas em Alimentos de Origem Animal por Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massas em Tandem" especifica o método analítico LC-MS/MS e os limites de quantificação (LQ) correspondentes para 13 antibióticos quinolonas. Esta nota de aplicação apresenta os resultados validados com sucesso para a análise de 13 resíduos de antibióticos quinolonas em carne de frango usando o sistema de espectrometria de massas em tandem de cromatografia líquida-quadrupolo triplo Wayeal LCMS-TQ9200 (LC-MS/MS).
Palavras-chave: LC-MS/MS, quinolonas, resíduos de medicamentos veterinários, segurança alimentar.
Sistema de Espectrometria de Massas em Tandem de Cromatografia Líquida Wayeal LCMS-TQ9200
Método de Cromatografia Líquida
Coluna de cromatografia: C18 3.0x100mm
Fase móvel: A: metanol com ácido fórmico a 0,1%, B: solução de ácido fórmico a 0,1%
Vazão: 0,4mL/min
Temperatura da coluna: 45°C
Volume de injeção: 3μL
Método de Espectrometria de Massas
Tabela 1 Parâmetros da Fonte de Íons de Espectrometria de Massas
| Fonte de Íons |
ESI, modo de íons positivos |
| Tensão da Fonte de Íons |
5500V |
| Vazão do Gás de Dessolvatação |
18000mL/min |
| Vazão do Gás Nebulizador |
2000mL/min |
| Vazão do Gás de Cortina |
5000mL/min |
| Vazão do Gás de Colisão |
800μL/min |
| Temperatura de Dessolvatação |
450°C |
| Temperatura do Gás de Cortina |
150°C |
Tabela 2 Parâmetros de Espectrometria de Massas para Cada Composto
| Compostos |
Q1 |
Q3 |
Potencial de Desaglomeração (V) |
Energia de Colisão (V) |
| Ácido Oxolínico |
262.1 |
244* |
100 |
25 |
| 160 |
100 |
50 |
| Flumequina |
262.1 |
202 |
115 |
44 |
| 244.1* |
115 |
24 |
| Norfloxacina |
320.1 |
302.1* |
90 |
27 |
| 233.2 |
90 |
33 |
| Enoxacina |
321.2 |
234 |
100 |
38 |
| 303* |
100 |
30 |
| Ciprofloxacina |
332.2 |
231 |
100 |
49 |
| 288 |
100 |
25 |
| Pefloxacina |
334.1 |
316* |
110 |
29 |
| 233.2 |
110 |
35 |
| Lomefloxacina |
352.1 |
265.1* |
110 |
31 |
| 334 |
110 |
29 |
| Danofloxacina |
358.1 |
340.1* |
100 |
32 |
| 283.1 |
100 |
32 |
| Enrofloxacina |
360.2 |
316.1 |
110 |
27 |
| 245.1* |
110 |
38 |
| Ofloxacina |
362.1 |
318.3 |
75 |
25 |
| 261.2* |
75 |
34 |
| Marbofloxacina |
363.2 |
72.1* |
100 |
25 |
| 345.2 |
100 |
29 |
| Sarafloxacina |
386.1 |
299.1* |
110 |
38 |
| 342 |
110 |
27 |
| Difloxacina |
400.2 |
299.1 |
110 |
38 |
| 382.2 |
120 |
30 |
Nota: O íon marcado com * é o íon quantitativo
1. Resultado do Experimento
1.1 Forma do Pico
A determinação de 13 antibióticos quinolonas foi concluída em 11 minutos. Todos os picos apresentaram boa forma de pico, sem o fenômeno comum de caudade antibióticos quinolonas. Todos os compostos demonstraram fortes respostas de sinal, atendendo aos requisitos para quantificação experimental.
Fig 1 Cromatograma de 13 Antibióticos Quinolonas
1.2. Faixa Linear
Uma quantidade apropriada de solução padrão mista de quinolonas foi diluída em série para preparar padrões de calibração abrangendo concentrações de 2 a 500 ng/mL. A avaliação da linearidade demonstrou excelente concordância com as concentrações nominais, com todos os desvios dentro do erro máximo permitido. O coeficiente de determinação (R²) variou de 0,9921 a 0,9998, confirmando a linearidade satisfatória para todos os componentes.
Tabela 3 Tabela de Faixa Linear
| Compostos |
Faixa Linear |
Coeficiente de Correlação Linear R2 |
| Ácido Oxolínico |
2-500ng/mL |
0,9989 |
| Flumequina |
2-500ng/mL |
0,9988 |
| Norfloxacina |
2-500ng/mL |
0,9968 |
| Enoxacina |
2-500ng/mL |
0,9989 |
| Ciprofloxacina |
2-500ng/mL |
0,9982 |
| Pefloxacina |
2-500ng/mL |
0,9992 |
| Lomefloxacina |
2-500ng/mL |
0,9921 |
| Danofloxacina |
2-500ng/mL |
0,9969 |
| Enrofloxacina |
2-500ng/mL |
0,9998 |
| Ofloxacina |
2-500ng/mL |
0,9941 |
| Marbofloxacina |
2-500ng/mL |
0,9997 |
| Sarafloxacina |
2-500ng/mL |
0,9946 |
| Difloxacina |
2-500ng/mL |
0,9973 |
Fig 2 Resultados da Faixa Linear para Antibióticos Quinolonas Selecionados
1.3. Limite de Detecção (LOD) e Limite de Quantificação (LOQ)
O Padrão Nacional de Segurança Alimentar GB 31658.17-2021 especifica um limite de detecção (MDL) de 2μg/kg e o limite de quantificação (MQL) de 10μg/kg. Neste método, todos os compostos alvo demonstraram relações sinal-ruído significativamente maiores que 3 a 2μg/kg e 10 a 10μg/kg, cumprindo totalmente os requisitos de sensibilidade especificados no padrão nacional.
Tabela 4 Relações Sinal-Ruído para Limites de Detecção e Quantificação de Compostos Alvo
| Composto |
SNR (S/N) |
| 2μg/kg |
10μg/kg |
| Ácido Oxolínico |
111.26 |
359.11 |
| Flumequina |
59.64 |
244.73 |
| Norfloxacina |
70.16 |
392.57 |
| Enoxacina |
23.74 |
80.26 |
| Ciprofloxacina |
37.91 |
99.26 |
| Pefloxacina |
28.70 |
125.81 |
| Lomefloxacina |
48.54 |
165.84 |
| Danofloxacina |
105.74 |
348.10 |
| Enrofloxacina |
35.97 |
120.82 |
| Ofloxacina |
51.67 |
287.26 |
| Marbofloxacina |
190.11 |
399.38 |
| Sarafloxacina |
38.11 |
160.79 |
| Difloxacina |
25.85 |
149.29 |
Fig 3 Cromatogramas LOD/LOQ para Quinolonas Selecionadas
1.4. Teste de Precisão
Uma solução padrão mista de antibióticos quinolonas em três concentrações (10, 50 e 100 ng/mL) foi injetada 6 vezes para comparar as variações do tempo de retenção e da área do pico. Conforme mostrado na tabela abaixo, todos os compostos quinolonas testados demonstraram desvios no tempo de retenção inferiores a 0,3% e desvios na área do pico abaixo de 5%, cumprindo totalmente o requisito do padrão nacional de RSD ≤15% para precisão.
Tabela 5 Teste de Precisão de Vários Compostos
Fig 4 Cromatogramas de Precisão de Compostos Selecionados
2. Conclusão
Este método empregou o sistema de cromatografia líquida-espectrometria de massas em tandem Wayeal LCMS TQ9200 para a determinação de antibióticos quinolonas em amostras de frango. Os dados experimentais demonstraram excelente desempenho cromatográfico com formas de pico bem definidas e ausência de cauda para todos os analitos, atendendo aos requisitos de sensibilidade especificados nos padrões nacionais. O método apresentou boa linearidade com coeficientes de correlação (R²) superiores a 0,99 para todas as curvas de calibração, juntamente com excelente reprodutibilidade, conforme evidenciado por desvios no tempo de retenção abaixo de 0,3% e variações na área do pico inferiores a 5%. A análise de três lotes de amostras de frango preparados independentemente não mostrou resíduos detectáveis de antibióticos quinolonas. Esses resultados confirmam que o método analítico, juntamente com o sistema Wayeal LC-MS/MS, é totalmente capaz de atender aos requisitos de detecção qualitativa e quantitativa de rotina para os analitos alvo em amostras de teste.
Por favor verifique seu email!
