Determinação de resíduos de resina em saponinas Panax Notoginseng por cromatógrafo gasoso Wayeal GC6100

A cromatografia gasosa desempenha um papel extremamente importante na detecção de resíduos de resina nas saponinas Panax notoginseng. Panax notoginsengas saponinas servem como matéria-prima central para medicamentos cardiovasculares e cerebrovasculares, como o Xueshuantong, e seu processo de purificação comumente emprega resinas de adsorção macroporosas. No entanto, este processo pode introduzir resíduos de solventes orgânicos prejudiciais, incluindo n-hexano, benzeno, tolueno, xileno, estireno e divinilbenzeno. Estes resíduos são potencialmente tóxicos para o corpo humano; portanto, é essencial estabelecer métodos analíticos sensíveis e precisos para um monitoramento rigoroso.

Este estudo foi conduzido de acordo com a última edição da Farmacopeia Chinesa, utilizando o cromatógrafo gasoso Wayeal Technology GC6100 equipado com um detector de ionização de chama (FID) e acoplado a um amostrador headspace automatizado para a determinação de resíduos de resina em amostras de saponina Panax notoginseng.

Palavras-chave: saponinas Panax notoginseng; solventes residuais; cromatografia gasosa; Detector FID; espaço livre.

1. Método Experimental

1.1 Configuração do Instrumento

Tabela 1 Lista de configuração do cromatógrafo a gás

1.2 Materiais Experimentais e Equipamentos Auxiliares

Padrões de referência: Materiais de referência certificados de soluções padrão de n-hexano, benzeno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenzeno e divinilbenzeno (adquiridos internamente), armazenados em recipientes fechados, sob refrigeração e protegidos da luz;

N,N-dimetilformamida;

Gás de arraste: Nitrogênio de alta pureza;

Gerador de hidrogênio;

Gerador de ar;

Amostrador automático de headspace;

Frascos headspace: Frascos de vidro headspace (20 mL).

1.3 Condições de Teste

1.3.1 Condições de referência para o amostrador Headspace

Temperatura do forno: 90°C;

Tempo de incubação: 30 min;

Temperatura da válvula de injeção: 110°C;

Temperatura da linha de transferência: 120°C;

Volume de injeção: 1,0mL (volume da alça).

1.3.2 Condições Operacionais de Referência para o Cromatógrafo Gasoso

Coluna analítica: coluna capilar FFAP, 30m×0,25mm×0,25μeu

Programa de temperatura: Temperatura inicial da coluna de 60°C manteve-se por 16 minutos e depois aumentou para 200°C a uma taxa de 20°C/min, e mantido por 2 min;

Taxa de fluxo da coluna: 1,0 mL/min;

Temperatura de entrada: 240°C;

Temperatura do detector: 300°C;

Taxa de fluxo de ar: 300mL/min;

Vazão de hidrogênio: 40mL/min;

Vazão de maquiagem: 20mL/min;

Injeção dividida com proporção de divisão de 2:1.

1.4 Preparação da Solução

1.4.1 Preparação da Solução Estoque Padrão de Referência

Pesar com precisão quantidades apropriadas dos padrões de referência de n-hexano, benzeno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenzeno e divinilbenzeno e dissolver em N,N-dimetilformamida para preparar uma solução contendo 20μg/mL de cada um de n-hexano, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenzeno e divinilbenzeno, e 4μg/mL de benzeno, respectivamente, servindo como solução estoque padrão de referência.

1.4.2 Preparação de solução de trabalho padrão mista

Transfira com precisão 2mL da solução estoque padrão de referência para um balão volumétrico de 50mL, dilua até o volume com solução de N,N-dimetilformamida a 25% e misture bem. Transfira com precisão 5mL desta solução para um frasco de headspace de 20mL, sele e a solução de trabalho padrão misturada é obtida.

1.4.3 Preparação de Solução Padrão para Teste de Limite de Detecção

Transfira com precisão 2mL da solução estoque padrão de referência para um balão volumétrico de 500mL, dilua até o volume com solução de N,N-dimetilformamida a 25% e misture bem. Transfira com precisão 5mL desta solução para um frasco de headspace de 20mL, sele e a solução padrão para o teste de limite de detecção é obtida.

2. Resultado e Discussão

2.1 Análise Qualitativa dos Padrões de Referência

Fig 1 Cromatograma do Solvente Branco

Fig 2 Cromatograma da solução de trabalho padrão mista

Tabela 2 Parâmetros cromatográficos da solução de trabalho padrão mista

Nota: Os cromatogramas acima mostram que todos os picos cromatográficos estão bem separados uns dos outros, com resoluções superiores a 1,5, atendendo aos requisitos para análise experimental.

2.2 Teste de Repetibilidade

Fig 3 Cromatogramas sobrepostos da solução de trabalho padrão mista para teste de repetibilidade (n = 5)

Tabela 3 Parâmetros cromatográficos da solução de trabalho padrão mista para teste de repetibilidade

Nota: A solução de trabalho padrão mista foi injetada continuamente por 5 vezes, e o RSD das áreas de pico foi≤1,5%.

2.3 Limite de Detecção

Fig 4 Cromatograma da Solução Padrão para Teste de Limite de Detecção

Tabela 4 Parâmetros Cromatográficos da Solução Padrão para Teste de Limite de Detecção

Nota: O limite de detecção (LOD) foi determinado a uma relação sinal-ruído (S/N) de 3, e o limite de quantificação (LOQ) foi determinado a uma relação sinal-ruído (S/N) de 10. Verificou-se que ambos os valores LOD e LOQ satisfazem os requisitos da norma.

2.4 Análise de Amostra

Pesar com precisão aproximadamente 0,1g de cada amostra (0,1017g, 0,1026g e 0,1023g, respectivamente) em frascos separados de headspace de 20mL e, em seguida, adicionar com precisão 5mL de solução de N,N-dimetilformamida a 25% a cada frasco, vedar e agitar bem para misturar.

Fig 5 Cromatogramas sobrepostos das três soluções de amostra

Fig 6 Cromatogramas sobrepostos da solução amostra e da solução padrão de referência

Nota: Nenhum n-hexano, benzeno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenzeno ou divinilbenzeno foi detectado nas amostras.

3. Conclusão

Neste estudo, um cromatógrafo gasoso Wayeal GC6100 equipado com um detector de ionização de chama (FID) e acoplado a um amostrador headspace automatizado foi empregado para a determinação de resíduos de resina em amostras de saponina Panax notoginseng. Os resultados experimentais demonstraram que todos os picos cromatográficos estavam bem separados, com resoluções superiores a 1,5, atendendo aos requisitos para fins analíticos. Os resultados dos testes de repetibilidade e limite de detecção deste método atenderam aos requisitos especificados. Nenhum n-hexano, benzeno, tolueno, p-xileno, o-xileno, estireno, 1,2-dietilbenzeno ou divinilbenzeno foi detectado nas amostras de teste, indicando resultados satisfatórios. Estes resultados demonstram que o cromatógrafo gasoso Wayeal GC6100 é totalmente capaz de atender aos requisitos analíticos para a determinação de resíduos de resina em amostras de saponina Panax notoginseng.

4. Atenção

Todas as operações que envolvem a preparação de solventes e soluções padrão, bem como o pré-tratamento da amostra, devem ser realizadas em capela. Deve ser usado equipamento de proteção individual adequado, de acordo com os regulamentos de segurança do laboratório, para evitar o contato com a pele e roupas.