Determinação de Uridina 5'-Monofosfato em Fortificantes Nutricionais de Alimentos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência

Como nucleotídeo, o 5'-monofosfato de uridina (UMP) é um intermediário fundamental no metabolismo dos ácidos nucleicos em organismos vivos. É o nucleotídeo mais abundante no leite de mamíferos, e a necessidade dietética de uridilato é significativamente maior do que a de outros nucleotídeos durante o crescimento e desenvolvimento da prole. Nos últimos anos, pesquisas revelaram que o UMP não apenas participa do metabolismo energético e da síntese de RNA, mas também melhora a função da barreira intestinal, modulando as vias de sinalização celular. Além disso, atua sinergicamente com vitaminas lipossolúveis para promover a absorção de nutrientes e a função imunológica. O UMP é comumente adicionado como fortificante nutricional a fórmulas infantis e rações para gado/aves, onde sua pureza e concentração impactam diretamente o valor nutricional e a segurança do produto final.

Palavras-chave:Fortificante nutricional alimentar, UMP, Nucleotídeos, Cromatografia líquida de alta performance.

1. Instrumentos e Reagentes

1.1 Lista de Configuração de HPLC

Tabela 1 Lista de Configuração de HPLC

1.2 Reagentes e Padrões

Tabela 2 Lista de Reagentes e Padrões

1.3 Material Experimental e Equipamento Auxiliar

Limpeza Ultrassônica

Misturador Vortex

2. Método e Condições do Experimento

Coluna de Cromatografia: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.

3. Resultado do Experimento

3.1 Teste de Adequação do Sistema

O teste de adequação do sistema demonstrou que o pico alvo tinha boa forma, com uma alta contagem de placas teóricas e sem picos interferentes em sua vizinhança, atendendo assim a todos os requisitos experimentais.

Fig 1 Cromatograma da Solução de Trabalho Padrão de 5'-Monofosfato de Uridina

Tabela 3 Resultados do Teste para a Solução de Trabalho Padrão de 5'-Monofosfato de Uridina

3.2 Teste de Repetibilidade

A solução de trabalho padrão de 5'-Monofosfato de Uridina (UMP) foi injetada seis vezes. O desvio padrão relativo (RSD) do tempo de retenção foi de 0,085% e o da área do pico foi de 0,191%. Ambos os valores ficaram abaixo do limite especificado de 2,0%, demonstrando conformidade com os requisitos experimentais.

Fig 2 Cromatogramas do Teste de Repetibilidade de 5'-Monofosfato de Uridina (UMP)

Tabela 4 Resultados do Teste de Repetibilidade para 5'-Monofosfato de Uridina (UMP)

3.3 Teste da Amostra

A área do pico da solução de trabalho padrão de 5'-monofosfato de uridina (20mg/L) foi de 322.525, enquanto a da solução da amostra de teste foi de 274.211. Com base no método do padrão externo, o teor de UMP na amostra foi determinado em 17mg/L.

Fig 3 Cromatograma da Amostra de Teste

Tabela 5 Resultados do Teste da Amostra

3.4 Teste de Adequação do Sistema para Substâncias Relacionadas

O teste da solução de adequação do sistema para substâncias relacionadas demonstrou que todos os picos dos compostos tinham boa forma, com altos números de placas teóricas e resolução maior que 2,0, atendendo assim aos requisitos experimentais.

Fig 4 Cromatograma da Solução de Trabalho Padrão de 5'-monofosfato de Uridina (UMP)

Tabela 6 Resultados do Teste para a Solução de Trabalho Padrão de 5'-monofosfato de Uridina (UMP)

3.5 Teste de Reprodutibilidade da Amostra

Após seis injeções consecutivas da solução de adequação do sistema, a repetibilidade do tempo de retenção para 5'-UMP, uracila e uridina foi de 0,031%, 0,058% e 0,102%, respectivamente, enquanto a repetibilidade da área do pico foi de 0,243%, 0,134% e 0,134%, respectivamente, atendendo aos requisitos experimentais.

Fig 5 Cromatograma do Teste de Reprodutibilidade da Amostra

Tabela 7 Resultados do Teste para a Repetibilidade do Tempo de Retenção de Substâncias Relacionadas

Tabela 8 Resultados do Teste para a Repetibilidade da Área do Pico de Substâncias Relacionadas

3.6 Teste de Sensibilidade para Substâncias Relacionadas

A relação sinal-ruído do pico principal de 5'-UMP na solução de teste de sensibilidade para substâncias relacionadas é significativamente maior que 3, atendendo aos requisitos experimentais.

Fig 6 Cromatograma da Solução de Teste de Sensibilidade de Substâncias Relacionadas

Tabela 9 Resultados do Teste da Solução de Sensibilidade de Substâncias Relacionadas

3.7 Teste de Soluções de Referência e Amostra de Substâncias Relacionadas

A área do pico da solução de referência (17 mg/L) foi de 275.856. A área total do pico de impurezas na solução de teste, excluindo 5'-monofosfato de uridina, foi de 38.021. Cálculo pelo método do padrão externo, o teor de impurezas na amostra é de 2.343mg/L.

Fig 7 Cromatograma do Teste da Solução de Referência de Substâncias Relacionadas

Tabela 10 Resultados do Teste da Solução de Referência de Substâncias Relacionadas

Fig 8 Cromatograma do Teste da Solução de Amostra Relacionada

Tabela 11 Resultados do Teste para a Solução de Amostra Relacionada

4. Conclusão

Neste experimento, com referência a "GB 1903.69-2024 Padrão Nacional de Segurança Alimentar: Intensificador Nutricional Alimentar 5'-Monofosfato de Uridina", a análise foi conduzida usando um sistema de cromatografia líquida de alta performance Wayeal LC3200 equipado com um detector ultravioleta. Os resultados experimentais mostram que o teste de adequação do sistema demonstrou boas formas de pico para todos os compostos, altos números de placas teóricas e resolução acima de 2,0, atendendo aos requisitos experimentais. A repetibilidade do tempo de retenção para a solução de trabalho padrão de 5'-Monofosfato de Uridina e substâncias relacionadas foi inferior a 0,2%, e a repetibilidade da área do pico foi inferior a 0,3%, indicando boa reprodutibilidade. A solução de teste de sensibilidade para substâncias relacionadas mostrou uma relação sinal-ruído para o pico principal de 5'-Monofosfato de Uridina significativamente maior que 3, atendendo aos requisitos experimentais. Todos os resultados do teste da amostra foram normais. Os dados acima atendem aos requisitos do instrumento especificados no método padrão.