Determinação do teor de aciclovir por cromatografia líquida de alto desempenho
O método analítico introduzido no presente artigo, com referência à edição de 2020 da Farmacopeia da República Popular da China no método de ensaio do aciclovir,utilizando o cromatógrafo líquido Wayeal de alto desempenho da série LC3200 com um detector DAD.
1Configuração do instrumento e método de experimentação
1.1 Configuração dos instrumentos
| - Não, não. | Nome | Quantidade |
| 1 | P3210Q Bomba Quaternária | 1 |
| 2 | CT3400 Forno de coluna | 1 |
| 3 | AS3210 Autosampler | 1 |
| 4 | Detector DAD3260 DAD | 1 |
| 5 | Nova Atom PC18 4,6x250 mm 5 μm | 1 |
| 6 | Estação de trabalho de cromatografia | 1 |
1.2 Método experimental
1.2.1 Preparar reagentes
Quadro 2 Lista de reagentes
| - Não, não. | Reagentes | Purificação |
|
1 2 3 4 5 |
Metanol Ácido fosfórico Hidróxido de sódio Aciclovir Guanina |
Puridade cromatográfica ((LC)) GR MOS 98% 99% |
1.2.1.1 Solução de ensaio: Colocar 40 mg de amostra num frasco de medição de 200 ml, adicionar 2 ml de hidróxido de sódio de 0,4% para dissolvê-lo e adicionar 25 ml de 0.1% (V/V) de solução de ácido fosfórico e diluí-la com água até à escalaSacuda bem.
1.2.1.2 Solução de referência: Colocar 1 ml da solução de ensaio num frasco de medição de 100 ml, adicionar 5 ml de solução de ácido fosfórico a 0,1%, diluir com água até à escala e agitar bem.
1.2.1.3 Solução de armazenamento de controlo de guanina: Colocar 10 mg de guanina de referência num frasco de medição de 50 ml, adicionar 5 ml de solução de hidróxido de sódio de 0,4% para dissolvê-la e adicionar 5 ml de 0.Solução de ácido fosfórico a 1%, diluir com água até à escala, agitar bem.
1.2.1.4 Solução de referência de guanina: Colocar 1 ml de solução de referência de guanina num frasco de 100 ml, diluir com água e agitar bem.
1.2.1.5 Solução adequada para o sistema: tomar uma quantidade adequada de cada uma das soluções de referência e da solução de referência de guanina, misturar em igual volume e agitar bem.
1.2.2 Condição de cromatografia
Quadro 3 Condições de cromatografia
| Coluna de cromatografia | Nova Atom PC18 Coluna de cromatografia, 4,6*250 mm, 5 μm | ||
| Fase móvel | Fase A móvel: Água | Fase B móvel: metanol | |
| Taxa de fluxo | 1 ml/min | ||
| Temperatura da coluna | 35°C | Comprimento de onda | 254 nm |
| Volume de injecção | 20 μl | ||
Quadro 4 Relação de fase móvel
| Tempo (min) | Fase A móvel | Fase B móvel |
| 0 | 94 | 6 |
| 15 | 94 | 6 |
| 40 | 65 | 35 |
| 41 | 94 | 6 |
| 51 | 94 | 6 |
2Resultado do experimento.
2.1 Solução de adequação do sistema
Fig. 1 Cromatograma de ensaio da solução de adequação do sistema
Tabela 5 Solução de adequação do sistema de dados de ensaio
| - Não, não. | Composto | Tempo de conservação | Área de pico | Número teórico da matrícula | Separação |
| 1 | Guanina | 5.698 | 138.675 | 17173 | 12.334 |
| 2 | Aciclovir | 8.425 | 139.902 | 15786 | N.a. |
Nota: A partir do gráfico acima e dos dados na tabela, pode-se ver que o aciclovir e a guanina têm melhores formas de pico e alto número teórico de placas.0, que preenche os requisitos da Farmacopeia.
2.2 Repetibilidade
Fig. 2 Cromatograma de repetibilidade de 6 injecções de adequação do sistema
Quadro 6 Dados de repetibilidade de 6 injecções de adequação do sistema Tempo de retenção da solução
| Amostra | - Não, não. | Guanina | Aciclovir |
|
Tempo de conservação |
1 | 5.698 | 8.408 |
| 2 | 5.701 | 8.415 | |
| 3 | 5.705 | 8.411 | |
| 4 | 5.701 | 8.405 | |
| 5 | 5.705 | 8.401 | |
| 6 | 5.705 | 8.398 | |
| RSD (%) | 0.048 | 0.074 |
Quadro 7 Dados de repetibilidade de 6 injecções de solução de adequação do sistema Área de pico
| Amostra | - Não, não. | Guanina | Aciclovir |
|
Área de pico |
1 | 136.997 | 138.836 |
| 2 | 138.496 | 139.117 | |
| 3 | 137.783 | 139.505 | |
| 4 | 136.663 | 138.204 | |
| 5 | 137.755 | 137.968 | |
| 6 | 137.789 | 139.374 | |
| RSD (%) | 0.475 | 0.452 |
Nota: De acordo com os dados do quadro acima, o RSD do tempo de retenção da guanina e do aciclovir na solução de adequação do sistema é de 0,048% e 0,074%, e o RSD da área de pico é de 0,475% e 0.452%Os resultados de reprodutibilidade são bons e satisfazem os requisitos experimentais.
